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細胞凋亡檢測常用的幾種測定方法
更新時間:2016-10-28 點擊次數:1270次

    
  生物化學和分子生物學上的差別,可以將二者區(qū)別開來。細胞凋亡的檢測方法有很多,下面介紹幾種常用的測定方法。
  
  一、細胞凋亡的形態(tài)學檢測
  
  根據凋亡細胞固有的形態(tài)特征,人們已經設計了許多不同的細胞凋亡形態(tài)學檢測方法。
  
  1光學顯微鏡和倒置顯微鏡
  
 ?。?)未染色細胞:凋亡細胞的體積變小、變形,細胞膜完整但出現發(fā)泡現象,細胞凋亡晚期可見凋亡小體。
  
  貼壁細胞出現皺縮、變圓、脫落。
  
 ?。?)染色細胞:常用姬姆薩染色、瑞氏染色等。凋亡細胞的染色質濃縮、邊緣化,核膜裂解、染色質分割
  
  成塊狀和凋亡小體等典型的凋亡形態(tài)。
  
  2熒光顯微鏡和共聚焦激光掃描顯微鏡
  
  一般以細胞核染色質的形態(tài)學改變?yōu)橹笜藖碓u判細胞凋亡的進展情況。
  
  常用的DNA特異性染料有:HO33342(Hoechst33342),HO33258(Hoechst33258),DAPI。三種染料與DNA的結合是非嵌入式的,主要結合在DNA的A-T堿基區(qū)。紫外光激發(fā)時發(fā)射明亮的藍色熒光。
  
  Hoechst是與DNA特異結合的活性染料,儲存液用蒸餾水配成1mg/ml的濃度,使用時用PBS稀釋成終濃度為2~5mg/ml。
  
  DAPI為半通透性,用于常規(guī)固定細胞的染色。儲存液用蒸餾水配成1mg/ml的濃度,使用終濃度一般為0.5~1mg/ml。
  
  結果評判:細胞凋亡過程中細胞核染色質的形態(tài)學改變分為三期:Ⅰ期的細胞核呈波紋狀(rippled)或呈折縫樣(creased),部分染色質出現濃縮狀態(tài);Ⅱa期細胞核的染色質高度凝聚、邊緣化;Ⅱb期的細胞核裂解為碎塊,產生凋亡小體。