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WestrnBlot的實驗方法原理是什么?
更新時間:2018-07-26 點擊次數(shù):1742次
WestrnBlot蛋白質(zhì)印跡法(免疫印跡試驗),它是分子生物學(xué)、生物化學(xué)和免疫遺傳學(xué)中常用的一種實驗方法。其基本原理是通過特異性抗體對凝膠電泳處理過的細(xì)胞或生物組織樣品進行著色。通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質(zhì)在所分析的細(xì)胞或組織中表達情況的信息。
蛋白質(zhì)免疫印跡(WestrnBlot)從蛋白質(zhì)混合物中檢出目標(biāo)蛋白質(zhì);(2)定量或定性確定細(xì)胞或組織中蛋白質(zhì)的表達情況;(3)用于蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)-DNA、蛋白質(zhì)-RNA相互作用后續(xù)分析。
實驗方法原理:
WestrnBlot是Western免疫印跡(WesternBlot)利用抗體進行檢測的方法。對已知表達蛋白,可用相應(yīng)抗體作為一抗進行檢測,對新基因的表達產(chǎn)物,可通過融合部分的抗體檢測。
與Southern或Northern雜交方法類似,但WestrnBlot采用的是聚WestrnBlot物是蛋白質(zhì),“探針”是抗體,“顯色”用標(biāo)記的二抗。
經(jīng)過PAGE分離的蛋白質(zhì)樣品,轉(zhuǎn)移到固相載體(例如硝酸纖維素薄膜)上,固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質(zhì),且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原,與對應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng),再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng),經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測蛋白水平的表達。